月季组培苗微嫁接技术规程
基金项目：本研究由国家自然基金项目（编号：３１２７２２０８，３１７７２３５２）；国家科技基础资源调查专项（编号：２０１７ＦＹ１００１００）；湖南省重点项目（编号：２０１６ＮＫ２１６２）
１ 引言
作为生物技术的基本手段之一，微嫁接在社会科技的进步中发挥着重要作用。微嫁接是组织培养与嫁接技术的结合，是一种嫁接到在温室中培养的砧木或试管中生长的砧木上的嫁接技术。现在微嫁接技术已经广泛应用于果树、花木等的研究与生产中。
许多优良的月季品种结实率低、种子不易萌发或者扦插难以生根，对于这些品种，嫁接是一种高效的繁殖手段。
２ 范围
本规程规定了月季微嫁接相关的设施、基质用料的选择与消毒，砧木和接穗的选择与消毒，微嫁接技术方法，嫁接后的管理等内容。本规程适用于月季微嫁接的生产。
３ 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＮＹ／Ｔ ２３０６－２０１３花卉种苗组培快繁技术规程。
４ 砧木与接穗培育
４．１ 砧木的选择
砧木一般选用长势好、抗病虫害能力强的品种。可以选择无刺蔷薇作为月季微嫁接的砧木。砧木可通过进行扦插和组织培养进行繁殖。月季微嫁接的接穗一般用组织培养进行繁殖。
４．２ 砧木的扦插
月季的微嫁接可以将培养瓶中培养的接穗嫁接到温室中的砧木或培养皿中的砧木上。选择当年生长充实、有弹性和花芽未萌发的枝条。上部剪成平口，下部用刀在节下５～８ｍｍ 处削成马耳型（大约４５～６０°），春、夏、秋季留最上部两片小叶，其余叶片除去，冬季在大棚内扦插应除去所有叶片。基质使用蛭石或者河沙，使用穴盆或者花盆即可，一般选用５０孔穴盆。一般扦插深度为３～５ｃｍ，用花盆或无孔穴盆株距保持在５～６ｃｍ即可，然后浇透水。把扦插好的月季置于阴凉处，注意保湿，如果温度不高可用塑料膜架设拱棚。温度２０～２８℃时３０ｄ就会生根。月季成活后，不必急于移栽。等根部老化变成褐色后移栽，成活率更高。
４．３ 砧木与接穗的组织培养
４．３．１ 外植体处理
选取无病虫害的月季幼茎，在自来水下冲洗３ｈ。除叶片，剪成长１．５ｃｍ的茎段每段带一个芽，先用浓度７０％的酒精消毒１５ｓ，然后用无菌水冲洗３次，再用有效浓度２％的ＮａＣｌＯ消毒１０ｍｉｎ，用无菌水冲洗３次。将消毒后的茎段芽朝上
置于启动培养基ＭＳ＋６－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１５ｍｇ／Ｌ中，培养温度２４℃±２℃，荧光灯光源，光照强度为３０００～４５００ｌｘ，光照时间为１２ｈ／ｄ。
４．３．２ 继代培养
将启动培养萌发的嫩芽切下，接种于继代增殖培养基ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ ＧＡ３１．０ｍｇ／Ｌ上，培养温度２４℃±２℃，荧光灯光源，光照强度为３０００～４５００ｌｘ，光照时间为１６ｈ／ｄ。当用作接穗的月季嫩茎长到２～３ｃｍ时即可进行嫁接。
４．３．３ 生根培养
当作为砧木的无刺蔷薇的嫩茎长到２～３ｃｍ时，将丛生的苗切成但株，转入生根培养基１／２ＭＳ＋ＩＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ中，待苗生根之后即可进行微嫁接。
５ 嫁接
５．１ 嫁接前准备
嫁接前需准备好剪刀、手术刀、镊子和Ｐａｒａｆｉｌｍ膜。大棚里的砧木需要在嫁接前１～２ｄ浇透水，保证水分充足。嫁接前可以对温室里的砧木喷施链霉素５００倍液＋春雷霉素６００倍液，预防细菌侵害。
５．２ 嫁接
嫁接方法采用劈接法。当砧木为组培苗时：在无菌条件下，选取生根培养基中已经长根的砧木，去掉组培苗的顶芽，留约２ｃｍ的茎段，将底部侧芽用镊子摘除，从砧木顶部纵切一个深度为０．２～０．５ｃｍ的切口。选取长约１ｃｍ，粗度与砧木相近的接穗，并将其基部削成楔形（长度与砧木切口深度相近）。将削好的接穗插入砧木，使其与砧木尽量贴合，然后用Ｐａｒａｆｉｌｍ 膜固定好。放入组培室继续培养，接穗成活后可进行练苗并移栽。
当砧木为温室中的栽培苗时：选取壮实的接穗组培苗，放入练苗室练苗，待组培苗适应外界环境后即可进行嫁接。嫁接应在荫凉的环境下进行，砧木选择当年生的嫩茎，去掉顶芽，将顶部以下侧芽摘除，从砧木顶部纵切一个深度为０．２～０．５ｃｍ的切口。选取长约１ｃｍ，粗度与砧木相近的接穗，并将其基部削成楔形（长度与砧木切口深度相近）。将削好的接穗插入砧木，使其与砧木尽量贴合，然后用Ｐａｒａｆｉｌｍ膜固定好。
６ 嫁接后管理
在培养皿里培养的嫁接苗放入培养室继续培养即可。温室里的嫁接苗在嫁接完成后的４ｄ内需要保持湿度，可以进行套袋或者搭建小棚进行保湿，同时注意要用遮阳网进行遮阳，５ｄ后以苗子不萎蔫为标准，逐步打开套袋或者小棚，直至进入正常的环境进行管理。
在培养皿中嫁接好的苗待接穗成活并充分生长之后即可进行练苗，将培养皿放入练苗室，先把盖子拧松，注意观察苗子，如果出现萎蔫迹象需重新拧紧盖子，以苗子比萎蔫为标准，最后完全打开盖子，这时就可以把苗子移栽上盆了。
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