虽然是选修，但也是最好拿分的
而且主要是总结和记忆的内容
简而言之，背就vans了
课题1：微生物的实验室培养01
培养基与微生物
1、培养基一般可分为固体（加了凝固剂，如琼脂）
液体培养基，but一般都含有水、无机盐、碳源、氮源
2、再就是有些微生物名堂多，要满足它的ph、特殊营养物
如：
乳酸杆菌要加维生素
霉菌的PH为酸性
细菌PH为中性或微碱性
02
无菌技术
主要有两种
1、消毒（不*死芽孢和孢子）
煮沸消毒法：100℃煮5-6min
巴氏消毒法：70-75℃煮30min或80℃煮15min
2、灭菌（可*死芽孢和孢子）
灼烧灭菌（就是用酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧）
干热灭菌，要用干热灭菌箱
高压蒸汽灭菌（一般用于培养基的灭菌，要用高压蒸汽灭菌锅）
最后，实验室可用紫外线或化学药物消毒
紫外线照射前，喷点石炭酸或煤酚皂溶液效果更好
03
实验操作
- 制备牛肉膏蛋白胨培养基
生物选修一课本p16自个儿看，就几个细节
如：
加热熔化琼脂时，不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂
- 倒平板
几个步骤就不说了，讲一下会考的
1、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
①防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
②避免培养基水分过快挥发
2、培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时
才能用来到平板，用手触摸来估计温度
3、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基
4、如果皿盖和皿底之间有培养液溅到，还可以用吗？
不能，因为微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上生长
- 菌落
- 平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
具体步骤看课本
该方法不能用于计数，适用于好氧菌
划线时，注意不要将最后一区的划线与第一区相连
将平板倒置放入培养箱中培养，防止菌落蔓延，便于形成单个菌落
划线之前都要灼烧接种环，是防止杂菌污染
每次划线后，仍要灼烧接种环
是*死上次划线结束后接种环上残留的菌种
- 稀释涂布平板法
稀释，后涂布平板，可用于微生物计数
具体操作看课本p19
04
菌种保藏
临时保藏，采用斜面保藏，置于4℃的冰箱
长期保存，采用甘油管藏
课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素【CO(NH2)2】并不能直接被农作物吸收
要用脲酶分解成氨才能被植物吸收
01
微生物的筛选
人为提供有利于目的菌株生长的条件
（包括营养、温度、PH等）
同时抑制或阻止其他微生物生长
- 选择培养基
将允许特定的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基
例如：
要从土壤中分离出尿素分解菌，就要使用以尿素为唯一氮源的培养基
- 统计菌种数目
1、采用稀释涂布平板法
2、一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，选三个数据
（如果一个数据与另外两个数据相差太大，如31，270，289，则该组数据的准确度不高，误差较大）
3、注意：
统计的【菌落数】往往比【活菌数】低
即【菌落数】＜【活菌实际数目】
因为当两个或多个细胞连在一起时
平板上观察到的只是一个菌落
还有就是【显微镜计数法】也常用于测定微生物数量
- 大肠杆菌使用滤膜法计数
每克样品中的菌株数=(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板的平均菌落数
V代表涂布平板时使用的稀释液的体积(mL)
M代表稀释倍数
- 设置对照
1、主要目的：
排除实验组中非测试因素对实验结果的影响
提高实验结果的可信度
2、如何设立对照，以及目的
①在适宜的环境下培养空白培养基
判断培养基中是否有杂菌污染
需要将未接种的培养基同时进行培养
②判断选择培养基是否具有筛选作用
需同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养
观察两种培养基上的菌落数目
通过对比得出结论
03
样品的稀释
测定土壤中细菌的数量，10*4，10*5和10*6倍
放线菌，10*3，10*4，10*5倍
真菌，10*2，10*3，10*4倍
计算的话题目会给稀释倍数
但有时候他直接问
应该选取哪种稀释倍数
04
微生物培养与观察
细菌，30-37℃，1-2天
放线菌，25-28℃，5-7天
霉菌，25-28℃，3-4天
可以每隔24h统计一次
选取菌落数目稳定的数据作为结果
防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
一般来说，在一定的培养条件下
（相同的培养基，温度及培养时间）
同种微生物表现出稳定的菌落特征，包括形状，大小，颜色等
标记培养皿时，应注明培养基种类，培养日期以及样品稀释度等
在以尿素为唯一氮源的培养基加入【酚红指示剂】，如果ph升高，指示剂将【变红】，则培养的样品中含有分解尿素的微生物
05
滤膜法
测定饮用水中的大肠杆菌数目，采用【滤膜法】
用伊红美蓝培养基
（要加入伊红美蓝，以及凝固剂如琼脂）
在该培养基上，大肠杆菌的菌落为【黑色】
以上都要背，都要背，背
