革兰氏染色法的原理是革兰氏阳性菌和阴性菌在化学和生理性质上差别比较大，染色体的反应也不一样，一般阳性菌和碘和结晶紫的复合物结合比较牢固，不容易脱色，而阴性菌的结合相对比较弱，容易脱色。

方法/步骤

1、涂片固定

在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。

2、染色

在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。

3、水洗

染色到一定的时间，拿住玻片使之成45度角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。

4、媒染

加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。

5、水洗，用吸水纸吸去水分

用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

6、脱色

加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。

7、复染

蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。

8、干燥，镜检

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

这是上世纪八十年代丹麦医师GRAM发现的，成为细菌检测和分类的重要依据。

细菌经紫料染色后，成紫红色，用碘酒再次染色，然后用酒精或丙酮冲洗，有的可以脱色称为阴性，有些不能脱色，称为阳性。细菌也因此分为二大类既革兰氏阳性和革兰氏阴性。