准备工作

1.仪器设备

CO2 培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅、水浴摇床，医用冰箱、-80°冰箱、移液器（一套）、眼科剪、眼科镊。

2.试剂耗材

小肠类器官培养基，小肠类器官消化液，小肠组织保存液，小肠类器官缓冲液，硫酸庆大霉素，双抗，组织固定液，基质胶，60mm细胞培养皿， 100μm滤筛，15ml离心管，1.5ml EP管若干，4度冰盒，眼科剪刀，眼科镊。

操作流程

1.类器官操作流程之——样本准备

（1）将组织放入含有器官保存液的取样瓶中，4℃从医院/实验室取回。

（2）将取样瓶消毒，组织取出放入培养皿样本拍照，并登记，大小，颜色，软硬程度，组织类型等信息。

2. 类器官操作流程之——清洗-剪碎
添加含有双抗、庆大霉素的类器官缓冲液浸泡，用眼科镊刮去肠道粘膜，肠绒毛等。在培养皿中用类器官缓冲液清洗三次（每次更换培养皿）后剪碎，剪成大约1mm3的组织块。静置2次。

3. 类器官操作流程之——消化-过滤
（1）用组织消化液在37℃进行消化10-15min（消化过程中随时观察消化情况）。
（2）类器官缓冲液终止消化，用枪头轻柔吹打可以看到液体变浑浊。