③ 抗性基因:最常见的是:Amp(氨苄青霉)、Tet(四环素)、Cmr(氯霉素)、SM(链霉素)、Hyg(潮霉素)。
④ pA:转录终止位点。
⑤ 报告基因:通常会有一两个蛋白,被用作报告基因。比如常见的copGFP(绿色荧光蛋白),Puro(嘌呤霉素),Lacz(乳糖操纵子)等等。和抗性基因不同,报告基因是为了显示过表达或是敲减的基因是否正常运作。有的报告基因会融合在蛋白中表达,有的会另外用一个独立的启动子进表达(比如shRNA的质粒中)。
3看MCS(多克隆位点)
多克隆位点为一系列限制性内切酶酶切位点,是外源DNA的插入位点,一般可通过酶切/连接的方式将外源DNA插入质粒。
4看外源DNA片段
质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低。
5是否含有表达系统元件
即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体,还是要以实验目的为准绳。
文章来源于江莱生物(shjianglai666)
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