固定化酶（immobilized enzyme)是20世纪60年代发展起来的一种新技术。所谓固定化酶，是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。通常酶催化反应都是在水溶液中进行的，而固定化酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理，使之成为不溶于水的，仍具有酶活性的状态。

酶固定化后一般稳定性增加，易从反应系统中分离，且易于控制，能反复多次使用。便于运输和贮存，有利于自动化生产，但是活性降低，使用范围减小，技术还有发展空间。固定化酶是近十余年发展起来的酶应用技术，在工业生产、化学分析和医药等方面有诱人的应用前景。

固定化酶的研究始于1910年,正式研究于20世纪60年代,70年代已在全世界普遍开展。酶的固定化(Immobilization of enzymes)是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内,仍能进行其特有的催化反应、并可回收及重复利用的一类技术。与游离酶相比,固定化酶在保持其高效专一及温和的酶催化反应特性的同时,又克服了游离酶的不足之处,呈现贮存稳定性高、分离回收容易、可多次重复使用、操作连续可控、工艺简便等一系列优点。固定化酶不仅在化学、生物学及生物工程、医学及生命科学等学科领域的研究异常活跃,得到迅速发展和广泛的应用,而且因为具有节省资源与能源、减少或防治污染的生态环境效应而符合可持续发展的战略要求。

固定化酶与水溶性酶相比的优缺点

优点：①固定化酶可重复使用，使酶的使用效率提高、使用成本降低。

②固定化酶极易与反应体系分离，简化了提纯工艺，而且产品收率高、质量好。

③在多数情况下，酶经固定化后稳定性得到提高。

④固定化酶的催化反应过程更易控制。

⑤固定化酶具有一定的机械强度，可以用搅拌或装柱的方式作用于底物溶液，便于酶催化反应的连续化和自动化操作。

⑥固定化酶与游离酶相比更适于多酶体系的使用，不仅可利用多酶体系中的协同效应使酶催化反应速率大大提高，而且还可以控制反应按一定顺序进行。

缺点：①固定化可能造成酶的部分失活，酶活力有损失。

②酶催化微环境的改变可能导致其反应动力学发生变化。

③固定化酶的使用成本增加，使工厂的初始投资增大、

④固定化酶一般只适用于水溶性的小分子底物，对于大分子底物不适宜。

⑤与完整菌体细胞相比，固定化酶不适宜于多酶反应，特别是需要辅助因子参加的反应。

⑥胞内酶进行固定化时必须经过酶的分离纯化操作。

固定化细胞和固定化酶比较,2个的优缺点

固定化细胞：优点： 固定化细胞内酶的活性基本没有损失。缺点： 固定化细胞只能用于生产细胞外酶.固定化酶：优点：容易与水溶性反应物和产物分离。.缺点： 一种酶只催化一种化学反应,而产物形成是通过一系列酶促反应得到的.

制备方法

分类

制备方法分类图

固定化酶的制备方法有物理法和化学法两大类。

物理方法包括物理吸附法、包埋法等。物理法固定酶的优点在于酶不参加化学反应,整体结构保持不变,酶的催化活性得到很好保留。但是,由于包埋物或半透膜具有一定的空间或立体阻碍作用,因此对一些反应不适用。

化学法包括结合法、交联法。结合法又分为离子结合法和共价结合法。是将酶通过化学键连接到天然的或合成的高分子载体上,使用偶联剂通过酶表面的基团将酶交联起来,而形成相对分子量更大、不溶性的固定化酶的方法.

其中吸附法和共价键法又可统称为载体结合法。

具体方法

吸附法

利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法。通常有物理吸附法和离子吸附法。

常用吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。

采用吸附法固定酶，其操作简便、条件温和，不会引起酶变性或失活，且载体廉价易得，可反复使用。

载体结合法

最常用的是共价结合法，即酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体形成不可逆的连接。在温和的条件下能偶联的蛋白质基团包括：氨基、羧基、半胱氨酸的巯基、组氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、丝氨酸和苏氨酸的羟基。参加和载体共价结合的基团，不能是酶表现活力所必需的基团。以中国首先采用的双功能团试剂“对位-β-硫酸酯乙砜基苯胺”偶联载体和酶为例，载体结合的步骤如下页反应式。

此法曾先后用于3′-核糖核酸酶、5′-磷酸二酯酶和葡萄糖淀粉酶等的固定化。此外酶通过物理吸附或离子吸附于载体制备固定化酶也是常用的方法。

交联法

依靠双功能团试剂使酶分子之间发生交联凝集成网状结构，使之不溶于水从而形成固定化酶。常采用的双功能团试剂有戊二醛、顺丁烯二酸酐等。酶蛋白的游离氨基、酚基、咪唑基及巯基均可参与交联反应。

包埋法

酶被裹在凝胶的细格子中或被半透性的聚合物膜包围而成为格子型和微胶囊型两种。包埋法制备固定化酶除包埋水溶性酶外还常包埋细胞，制成固定化细胞，例如可用明胶及戊二醛包埋具有青霉素酰化酶活力的菌体，可连续水解帤基青霉素，工业生产6-氨基青霉烷酸。

酶经过固定化后，比较能耐受温度及pH的变化，最适pH往往稍有移位，对底物专一性没有任何改变，实际使用效率提高几十倍（如5′-磷酸二酯酶的工业应用）甚至几百倍（如青霉素酰化酶的工业应用）。

固定化酶的应用

酶工程作为生物工程4个组成部分之一，已广泛应用于工业生产中的食品、医药、纺织等部门，但天然酶稳定性低，对高温、有机溶剂极其敏感，易失活，不能重复使用，反应后混入产品，使产品难以纯化。而通过物理或化学的方法，将酶固定于载体上，所得的酶不仅保留了酶原有的高活性、高选择性，并且克服了天然酶的缺点，还便于反应的连续化和自动化。因此，固定化酶已经成为近代酶工程领域中主要的研究内容之一。固定化酶较高的稳定性，使其在工业生产中有广阔的前景。

食品工业

罐装液态茶饮料自20世纪80年代开发成功以来已迅速发展成为当今国际饮料市场的主流产品之一。增香和除混是制约茶饮料发展的2个重要因素。将单宁酶和β-葡萄糖甘酶进行共固定化，并以绿茶、红茶、乌龙茶为例研究了共固定化酶的性质，结果表明：经共固定化酶处理后，绿茶、红茶、乌龙3类茶的香精油总量均有所增加；3类茶的非酯型儿茶素含量增加，而酯型儿茶素的含量下降。

燃料工业(生物柴油)

生物柴油主要是以植物油和动物油为原料而制成的，其主要优点是：生物可降解性、可再生资源、无毒、废气排放量小，是环境的友好燃料，可作为石油的替代品。目前生产生物柴油主要采用化学法。此方法工艺复杂、能耗高、产品易变质、生产过程有污染，因此，已经有学者研究利用生物酶法，即动植物油脂和低碳醇通过脂肪酶进行酯化反应，制备相应的脂肪酸酯。脂肪酶广泛地应用于生物柴油工业。等研究了利用多孔渗水物质为载体固定脂肪酶，使其可在低水环境中合成生物柴油。

医药工业

现代制药也大多采用化学方法，但化学法工艺复杂，原料浪费严重且易产生污染，因此人们渐渐转向生物酶法制药的研究，获得了很多可喜的成果。头孢菌素正渐渐代替青霉素成为临床应用上主要的抗生素。梅建凤等利用固定化青霉素酰化酶催化合成头孢羟氨苄，并选择了较好的合成工艺，使此反应的转化率可达到80.3%