【考纲要求】

1.基因工程的诞生(Ⅰ)。

2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)。

3.基因工程的应用(Ⅱ)。

4.蛋白质工程(Ⅰ)。

5.植物的组织培养(Ⅱ)。

6.动物细胞培养与体细胞克隆(Ⅱ)。

7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ)。

8.实验：DNA的粗提取与鉴定。

选修那不用说，全国卷每张卷子都是15分。

后面的真题

这次找出来 考了基因工程和细胞工程的

你猜有几套卷考了？

1.基因工程

(1)基因工程的3种基本工具

①限制性核酸内切酶：识别特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。

②DNA连接酶：

a.E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端；

b.T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。

③载体：需具备的条件包括：a.能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；b.有一个至多个限制酶切割位点；c.具有特殊的标记基因，以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。

(2)获取目的基因的途径：

①从基因文库中获取；

②利用PCR技术扩增；

③化学方法直接人工合成。

(3)基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子及标记基因等。

(4)将目的基因导入受体细胞

①植物：体细胞或受精卵——常用农杆菌转化法(双子叶植物和裸子植物)、花粉管通道法、基因枪法(单子叶植物)。

②动物：受精卵——显微注射技术。

③微生物：细菌(常用大肠杆菌)——感受态细胞法(钙离子处理法)。

(5)目的基因的检测与鉴定方法

①检测目的基因是否插入转基因生物的DNA上：DNA分子杂交技术。

②检测目的基因是否转录出mRNA：分子杂交技术。

③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原—抗体杂交技术。

④个体生物学水平鉴定：根据表达性状判断或抗性实验。

2.易混辨析

①限制酶≠DNA酶≠解旋酶

限制酶的作用是识别双链DNA分子上某种特定的核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开；DNA酶的作用是将DNA水解为基本组成单位；解旋酶的作用是将DNA两条链间的氢键打开形成两条单链。

②DNA连接酶≠DNA聚合酶

DNA连接酶能连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。

③启动子(DNA片段)≠起始密码子(位于mRNA上)；

终止子(DNA片段)≠终止密码子(位于mRNA上)。

3.细胞工程

(1)植物组织培养

①培养基的组成：大量元素、微量元素、有机物、蔗糖及植物激素、琼脂等。添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压。

②若生产人工种子，则培养到胚状体阶段；若提取细胞产物，则一般培养到愈伤组织阶段；若培育新个体，则应培养到试管苗阶段。

(2)植物体细胞杂交的关键

①酶解法——用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。

②促融剂——常用聚乙二醇。

③杂种细胞的形成标志——新细胞壁的形成。

④培养杂种植株的技术——植物组织培养。

⑤杂种植株培育成功的原理——离体的植物细胞具有全能性。

(3)动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶的作用不同

第一次：处理剪碎的组织，使其分散成单个细胞；

第二次：使贴壁生长的细胞从瓶壁上脱落下来。

(4)原代培养与传代培养的区别

区分原代培养和传代培养的关键是是否分瓶培养。细胞贴壁生长到一定程度需要用胰蛋白酶处理，然后再分瓶培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常称为传代培养。

(5)克隆动物时选择受体细胞为去核卵母细胞的原因

①营养丰富；

②体积大，易操作；

③含有激发细胞核全能性表达的物质。

4.PCR技术扩增

(1)原理：DNA双链复制。

(2)条件：模板DNA、引物、游离的dNTP(dCTP、dATP、dGTP、dTTP)、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

变性：90～95 ℃，DNA解链

↓

复性（退火）：55～60 ℃，引物与单链DNA结合

↓

延伸：70～75 ℃，在热稳定DNA聚合酶(Taq酶)作用下合成子链

5.细胞工程技术的原理

(1)植物组织培养：细胞的全能性。

(2)植物体细胞杂交：细胞的全能性、细胞膜的流动性。

(3)动物细胞培养：细胞的增殖。

(4)动物体细胞核移植及克隆：动物细胞核的全能性。

(5)动物细胞融合：细胞膜的流动性。

(6)单克隆抗细胞融合体的制备：细胞膜的流动性、细胞的增殖。

6.植物细胞工程两大技术

7.植物体细胞杂交

①植物细胞A和植物细胞B杂交获得的杂种细胞的类型有三种(只考虑细胞的两两融合)：AA型、BB型、AB型，符合要求的只有AB型，需要进行筛选。

②杂种植株遗传物质的变化：杂种植株的染色体数通常是两亲本细胞染色体数目之和，属于异源多倍体。杂种植株的变异类型属于染色体变异。

8.克隆动物的培育

(1)所需技术手段：动物细胞培养、动物细胞融合、早期胚胎培养和胚胎移植等。

(2)克隆动物遗传物质的来源：绝大部分来自供体细胞核，少部分来自卵母细胞的细胞质。

9.单克隆抗体的制备

(1)3种细胞的特点

①经免疫处理的B淋巴细胞：能分泌抗体，不能大量增殖。

②骨髓瘤细胞：能大量增殖，不能分泌抗体。

③杂交瘤细胞：既能分泌抗体，又能大量增殖。

(2)2次筛选的目的

①第1次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为经免疫处理的B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞)。

②第2次筛选：利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。