从NCBI数据库中，查询得到Psy2基因的不同物种直系同源蛋白序列，使用软件clustalx1.83，进行“docompleteAlignment”比对，接着将比对结果输入分子进化遗传分析软件MEGA5.1，将其转换为.meg格式并保存，最后采用NeighborJoining算法，构建蛋白质进化树。

随后我们需要构建Psy2基因的RNAi表达载体，从自交系F349的新鲜叶片中提取RNA，反转录后，以cDNA为模板，进行Psy2基因的干扰片段克隆，使用高保真酶，以确保所克隆干扰片段的高保真性。

实验设计的干扰片段Psy2a-RNAi部分，位于编码Psy2激酶催化区的基因序列，Psy2a干扰片段克隆，使用正向引物Psy2a-BamHⅠ：5'GCGGGATCCGAACAT⁃GTGGAAAGAAGGGAAAATAG3'（含BamHⅠ酶切位点），反向引物Psy2a-SpeⅠ：5'GCGACTAGTGGGCTGAACGATCAGTTTTAGTTATG3'（含SpeⅠ酶切位点）。

将连接干扰片段的克隆载体，经BamHⅠ和SpeⅠ双酶切后，回收带有酶切粘性末端的干扰片段。

将中间载体P1022，使用BamHⅠ和SpeⅠ、XbaⅠ和BglⅡ前后分别进行2次双酶切，第1次酶切后连接带有粘性末端的干扰片段，得到含有正义干扰片段的P1022中间载体阳性克隆。