我们可以看到，在装配好的中间载体经BamHⅠ和SacⅠ双酶切后，显示得到一条RNAi表达盒长度的条带。

将装配好的Psy2a-RNAi表达盒，与P3301表达载体线性片段，通过BamHⅠ和SacⅠ粘性末端分别连接，最终得到构建好的Psy2a-RNAi-P3301表达载体。

将Psy2aRNAi-P3301表达载体转化大肠杆菌DH5α，提取质粒经BamHⅠ和SacⅠ双酶切鉴定，结果显示，RNAi表达盒长度位于marker梯度的750～1000bp之间，表明Psy2a-RNAi-P3301表达载体构建成功。

本实验以玉米HIⅡ的幼胚为受体材料，采用基因枪轰击法，进行转基因操作。

之后设计两对特异性引物，进行T0代转基因植株的阳性株检测，一对特异性引物组合的正向引物，来自表达载体P3301的泛素启动子Ubi，反向引物来自Psy2a-RNAi片段。

另一对是bar基因引物组合，两对特异性引物检测结果显示，共得到9个阳性转基因植株。

本实验使用qRT-PCR，分析转基因阳性株中Psy2基因干扰后的表达量，设置2个时间点：苗期和成株期（开花期）。

从结果可以看出，转基因Psy2a-RNAi，在苗期Psy2a-2、Psy2a-3、Psy2a-4与对照（CK1）相比，表达量分别降低47.6%、61.2%和41.8%，Psy2a-5的表达量没有明显变化。

成株期转基因植株Psy2a-1和Psy2a-6，与对照（CK2）相比干扰效果尤为显著，表达量分别降低86.3%和86.9%。