该样品可以直接用于大肠杆菌转化，通常使用2μl反应样品进行转化，可以使用LB Amp培养基上的菌落进行小规模制备。

进入载体的pCR-Blunt II-TOPO携带卡那霉素抗性基因，因此未反应的进入载体将永远不会在LB Amp培养基上生长，这样就避免了未反应的质粒对菌落的污染。

在50个循环的重复BsaI消化和连接中，成功连接的克隆会存活和积累，因为一旦没有BsaI识别位点的两个内聚末端连接在一起，该位点就无法重新消化。

为了确保正确的克隆，所有模块必须按照我们期望的正确顺序进行连接，并在带有AmpR基因的载体中进行克隆，这可以通过使用NotI酶进行消化来进行验证。

将成功的质粒进行S. pombe的转化，使用FseI酶对质粒进行线性化，选择适当的S. pombe宿主菌株，并按照使用乙酸锂的标准方案进行DNA转化。

转化后，选择在含有适当抗生素的固体培养基上能够生长的稳定菌落，或者选择在无需适当补充剂（如亮氨酸或尿嘧啶）的最小培养基上生长。

当使用赖氨酸1或arg1靶模块时，正确的转化体应具备抗生素耐药性和赖氨酸或精氨酸的营养需求。

可以使用不含赖氨酸或精氨酸的最小培养基进行测试，当使用co2和z2时，进行集落PCR以仔细检查消化质粒的正确插入。