1.1.2试剂

琼脂糖、葡萄糖、蔗糖、胰蛋白胨、酵母提取物（粉）（均为生化试剂）；溶壁酶（18 000 U/g）：纤维素酶（7 000 U/g）、蜗牛酶（破壁率90%）、亚硝基胍（nitrosoguanidine，NTG）、 4',6- 二脒基-2- 苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole， DAPI）、GenSTAR Stain RED核酸染料。

2×ES Taq Master Mix试剂盒：；脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA） Marker：其他试剂均为分析纯剂。

1.1.3培养基

完全酵母提取物培养基（complete yeast extract medium， CYM）（CYM再生培养基）：葡萄糖2%、蛋白胨0.2%、酵母粉0.1%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.046%、磷酸氢二钾 0.1%、琼脂1.5%（液体培养基不添加）。

0.6 mol/L甘露醇（再生培养基中添加）、蒸馏水配制，pH值自然，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。

马铃薯葡萄糖琼脂（potato dextrose agar，PDA）

培养基：土豆200 g，切片、煮沸10 min，3～4层纱布过滤取滤液，加入葡萄糖2%、琼脂1.5%，蒸馏水配制，pH值自然， 121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。

1.2仪器与设备

1.3.1原生质体的制备

CYM液态培养法

将六妹羊肚菌等菌株接种于置有玻璃纸（直径8.5～9.0 cm）的CYM平板上，24 ℃倒置培养72 h，长刀片刮下转接于CYM液体培养基中。