第三步：用量筒加入相应容量甘油。由于甘油较为粘稠可粘附于量筒壁，应使用无菌蒸馏或经煮沸后的冷水冲洗后全部转移至配制容器中。

第四步：使用无菌蒸馏或经煮沸后的冷水加入容器至10L刻度线。

第五步：制备后立即盖好容器盖以防蒸发。

第六步：轻轻摇动以使溶液混合。

第七步：立即分装至成品容器（如：500ml或100ml塑料瓶）中，使用前应隔离静置72小时，以保证醇中或容器中存在的芽孢被*灭。