三聚氰胺（melamine）学名三氨三嗪，别名密胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。作为一种重要的化工原料，主要用于生产塑料、胶水和阻燃剂。由于每个三聚氰胺分子中都含有6个氮原子，含氮量高，近年来在饲料生产中被非法添加用于提高饲料中非蛋白氮的含量。2007年美国发生了多起宠物中毒死亡的“毒粮”事件；2008年，我国爆发了因食用含有三聚氰胺的婴儿奶粉引发婴儿尿路结石以及鸡蛋中检出三聚氰胺等一系列事件，使得三聚氰胺这种普通的化工原料引起了全社会的广泛关注。本部分综述了三聚氰胺的理化性质、代谢动力学、毒性、国内外限量要求以及残留检测的样品前处理、仪器测定方法等内容，以期为该类化合物的全面了解和残留检测提供参考。
1理化性质
三聚氰胺是三嗪类含氮杂环有机化合物，分子式为C3N6H6，相对分子质量126.15，分子中66.6%为氮原子，密度1.573g/cm3。室温下三聚氰胺外观为一种白色单斜棱晶体，20℃水中溶解度为31g/L，水沸腾时溶解度增加到25g/L。微溶于乙醇，不溶于乙醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。常压熔点354℃，快速加热至300℃升华。一般情况下较稳定，高温下可能会分解释放出氰化物。
三聚氰胺的pKb为9.0，水溶液呈弱碱性（pH＝8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性（pH 5.5~6.5）情况下，与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺及其代谢产物化学结构见图7-12。
2代谢动力学
2.1在动物体内的吸收与分布
Mast等在Fischer344雄性大鼠上的研究发现，大鼠在单剂量口服0.38mg的三聚氰胺后，其在血液、血浆和肝脏中的浓度相似，提示三聚氰胺进入体内后可能分布在全身体液中。Wu等以10mg/kg的剂量给成年大鼠注射三聚氰胺后研究其在机体内的分布，发现大鼠血浆、胰腺、膀胱、肾脏、肝脏和脑中均有三聚氰胺的分布，且在肾脏中的浓度最高。随后研究发现，以100mg/kg的剂量每天给大鼠灌服三聚氰胺，灌服14d后，膀胱、肾脏、胰腺、肝脏中均有三聚氰胺分布，其中膀胱中三聚氰胺浓度最高。研究表明三聚氰胺的给予途径或给予方式不同，三聚氰胺在动物体内的分布不同。
2.2在动物体内的代谢与排泄
目前研究表明，三聚氰胺在机体内的代谢属不活跃代谢或惰性代谢，直接以原型或同系物形式从尿液中排出。Mast等研究指出，大鼠在单剂量口服三聚氰胺后，三聚氰胺会被迅速吸收，60min内血浆中的三聚氰胺达到峰值，90%的三聚氰胺在24h内经肾脏排出体外，而三聚氰胺在大鼠血浆中的半衰期为2.7h，少量的三聚氰胺从大鼠呼气（0.2%）和粪便（0.64%）中排出，同时血浆和肝中的浓度差异较小，但肾脏和膀胱中的浓度明显高于血浆，其中膀胱中的浓度最高，表明三聚氰胺在Fischer344雄性大鼠中并没有经过代谢。Baynes等按6.13mg/kg的剂量给5头断奶仔猪静脉注射三聚氰胺，结果表明三聚氰胺在断奶仔猪血浆中半衰期为4.04h，肾清除率为27mL/min，而表观分布容积为0.61L/kg。黄小燕等研究发现，日粮中添加100mg/kg、500mg/kg和1 000mg/kg三聚氰胺饲喂的仔猪血浆中三聚氰胺半衰期分别为6.53h、6.02h和6.51h。Wu等在大鼠上的研究发现，三聚氰胺的口服生物利用度为98.1%，在单次口服摄入100mg/kg的三聚氰胺后，63%的三聚氰胺在96h后重新在尿液中被检测到。这些研究均表明，三聚氰胺进入动物体内可迅速经肾脏排出，在哺乳动物上，尿液是三聚氰胺排泄的最大途径，而在产蛋鸡上，三聚氰胺也可通过蛋排泄，但不同种属和不同动物间三聚氰胺代谢的差异较大。
2.3在动物产品中的残留和清除
Yi等在产蛋鸡上研究了摄入三聚氰胺污染的日粮后蛋中三聚氰胺的沉积范围，日粮中按5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg或100mg/kg的剂量加入三聚氰胺，收集1d、3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d的蛋样分析，从第1天到第15天，蛋中三聚氰胺含量差异不显著，说明蛋鸡体内积聚三聚氰胺无累积效应，但随着饲料污染程度的加速呈上升趋势。Wendy等研究发现鱼类摄入299~471mg/（kgd）的三聚氰胺3d后，鲶体内的三聚氰胺含量为81~210mg/kg，鳟体内为34~80mg/kg，罗非鱼体内为0.02~177mg/kg，鲑体内为58~94mg/kg。Bai等研究了三聚氰胺在蛋鸡组织和鸡蛋中的沉积和消除规律，连续饲喂蛋鸡8.6mg/（kg·d）、17.4mg/（kg·d）、33.6mg/（kg·d）、62.6mg/（kg·d）和140.9mg/（kg·d）的三聚氰胺34d，饲料中高剂量的三聚氰胺与组织和蛋中高浓度的三聚氰胺检出有相关性。在所有检测样品中，蛋中三聚氰胺浓度最高，十二指肠浓度最低。当停止添加三聚氰胺第10天后，蛋鸡组织中三聚氰胺浓度降至2.5mg/kg；第7天，蛋中检测不到三聚氰胺；第20天，组织中也检测不到三聚氰胺。Shen等在泌乳期奶牛上研究了不同剂量三聚氰胺从饲料到奶中的转移。分别按照0（对照组）mg/d、90mg/d、270mg/d和450mg/d的剂量，连续饲喂13天，进行为期19天的试验。结果发现，奶中三聚氰胺含量在第3天逐渐增加，停止添加后第4天所有试验组均未检测到三聚氰胺；三聚氰胺从饲料到奶中转移率不受其添加剂量的影响，但与产奶量呈线性相关。王蔚研究了日粮中不同水平的三聚氰胺在育肥猪血液和体组织中的残留和消除规律。试验结果表明，育肥猪摄入三聚氰胺对其采食量、日增重及饲料转化率无显著影响；摄入含0.21~1 000mg/kg三聚氰胺饲料42d后，组织中三聚氰胺的浓度分别为0.04~5.61μg/g（肾脏）、0.03~2.80μg/g（背肌）、0.02~2.58μg/g（肝脏）、0（未检出，ND）~2.56μg/g（脑）、0.02~.252μg/g（心肌）和0.02~2.55μg/g（十二指肠）；摄入含1 000mg/kg三聚氰胺饲料42d后，上述所有组织中三聚氰胺的残留量超过国际上规定的2.5mg/kg的限量标准。停止添加三聚氰胺5d后，育肥猪组织中三聚氰胺的残留快速降至限量标准以下的水平，但三聚氰胺在组织中残留越多，越难得到清除。
3毒性
三聚氰胺在胃的强酸性环境中水解，首先生成三聚氰酸二酰胺，并进一步水解生成三聚氰酸，三聚氰酸在肠道内被吸收进入血液，达到一定浓度后会对机体产生影响。经济合作与发展组织的报告中指出，三聚氰胺的LD50：小鼠为4 550mg/kg（口服），大鼠为3 161mg/kg（口服），且仅高剂量三聚氰胺对动物有毒性效应，属轻微毒性。虽然三聚氰胺毒性较低，但三聚氰胺摄入达到特定量后仍会对生物体产生影响，主要表现为膀胱炎、泌尿系统结石形成等。通过三聚氰胺自身对大鼠影响的研究，美国FDA（2008年）认为，三聚氰胺的每日可耐受摄入量（TDI）为0.63mg/kg。
3.1对泌尿系统的影响
目前认为三聚氰胺的生物学效应的主要靶器官是泌尿系统。由于三聚氰胺在动物体内只通过肾脏清除，且清除速度很快，因此三聚氰胺的毒性主要表现为肾毒性。Clark等在绵羊上的研究发现，给绵羊每天饲喂10g三聚氰胺4周后，绵羊采食量下降，出现少尿症状，死亡前血液中尿素氮和肌酐水平升高；对死亡动物的检查发现动物表现出血性膀胱炎的症状，且有晶体沉积在肾小管中。有研究报道，猪和鱼每日摄入400mg/kg的三聚氰胺后，只能存活3d。Xie等在大鼠上的研究发现，三聚氰胺处理组大鼠的肾出现水肿，重量也比对照组有所提高；组织病理学检查发现高剂量三聚氰胺组和三聚氰胺-三聚氰酸组远曲肾小管有大量的管状扩张和少量的出血，肾小球则是正常的，晶体主要沉积在肾乳头的集合管中，肾间质观察到有炎症发生。Brown等对美国2004年及2007年死于三聚氰胺污染食物的16只猫和犬的临床表现和解剖结果也证实，三聚氰胺主要造成泌尿系统损伤。16只动物都出现了尿毒症，同时在远曲肾小管或集尿管中可见有条纹的独特晶体，结晶颜色淡绿，大部分呈类圆形，部分呈球形。Lam等研究了三聚氰胺对人泌尿系统的影响。结果显示大部分结石位于肾盂，超声测定大小为2.5~18mm，结石直径在10mm以下的患儿，其尿液中三聚氰胺浓度每升高10μg/mmol肌酐，结石直径增加1mm，提示三聚氰胺暴露水平越高，结石越严重，表明肾结石的大小跟尿液中的三聚氰胺浓度呈正相关。Guan等也发现，大部分三聚氰胺结石患儿无明显的临床症状，少部分结石患者出现少尿、血尿、蛋白尿等非特异性表现，部分出现多发性结石及尿道扩张，严重者出现弥漫性肾损害，肾功能衰竭和腹水。Kobayashi等研究了小鼠摄入三聚氰胺和三聚氰酸后肾结晶形成的机制和肾衰竭的发生，结果表明，在单独摄入三聚氰胺或低剂量三聚氰胺-三聚氰酸混合物，肾中未发现晶体，但随着剂量的增加和时间的推移，混合物处理组在小鼠远曲肾小管内和集合管内出现了晶体。这些结果说明单独的三聚氰胺不能诱导晶体的形成或引起肾衰竭。
但研究发现两者同时存在时，毒性则增加。Puschner等分别把三聚氰胺、三聚氰酸及两者的混合物分别以不同剂量给予试验动物（猫），结果显示，在单独给予三聚氰胺或三聚氰酸时，没有引起猫的肾功能损害，而服用两者混合物的猫在48h后出现了肾功能衰竭。Dobson等以SD大鼠为试验对象，单独给予三聚氰胺或三聚氰酸对SD大鼠的肾功能没有影响；而联合给予三聚氰胺与三聚氰酸或给予三聚氰胺与三聚氰酸、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺的混合物，结果证明两者或四者的混合物导致了SD大鼠肾功能的损害及肾结石的形成。三聚氰胺与同类物结合在一起，在肾小管中形成一种不溶性的晶体，最终导致管腔的阻塞及肾功能衰竭。
3.2对血液生化指标的影响
黄小燕等研究发现，仔猪饲料中添加三聚氰胺后有降低谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活性的趋势。而Wang等在妊娠母鼠上的研究发现，饲喂三聚氰胺对其血液中GPT、GOT的活性无显著影响。王蔚利用日粮添加三聚氰胺饲喂育肥猪的试验，测定了猪血液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶的活性及血肌酐和胱抑素C的含量。结果表明，日粮中较高剂量三聚氰胺（1 000mg/kg）的添加使育肥猪血液中的28d的谷丙转氨酶和42d的血肌酐显著升高（P＞0.05），对血浆胱抑素C含量无显著影响。
3.3对繁殖及发育的影响
研究表明，动物长时间接触三聚氰胺会导致不孕和胚胎毒性。Zhang等研究发现，三聚氰胺会增加精子的畸形率和导致DNA的损伤。Wang等在小鼠上研究了三聚氰胺通过胎盘转运的可能性及其对胎儿和妊娠母鼠的影响，发现按低剂量（40mg/kg）和高剂量（400mg/kg）从妊娠期第13天到第20天给F334小鼠强饲三聚氰胺，低剂量组小鼠的羊水中未检测到三聚氰胺，高剂量组血浆和胎儿三聚氰胺含量极显著高于低剂量组，这些结果说明摄入三聚氰胺通过胎盘屏障到达胎儿具有剂量依赖效应，但三聚氰胺剂量的不同并不影响母鼠的体重、胎儿数、胎儿和胎盘的重量，且胎儿的肾脏中也未发现结晶体。
3.4致癌性
按照WHO下属的IARC的划分，三聚氰胺归于第三类致癌物，即其是对人体致癌性尚未归类的物质或混合物。三聚氰胺的致癌性仅在大鼠和小鼠上有研究。雄性大鼠摄入三聚氰胺后会患膀胱、输尿管移行细胞癌；三聚氰胺对雌性大鼠无致癌性，但会引起移行细胞刺瘤的发生，说明三聚氰胺对不同性别的动物毒性不同。雄性大鼠膀胱肿瘤的发生率与泌尿系统结石的形成和持续暴露于高剂量的三聚氰胺高度相关。雄性大鼠患膀胱癌的机制与DNA损伤无关，但可能是由上皮细胞的增生和膀胱中有结晶沉淀导致的。这些研究同时表明，三聚氰胺在造成膀胱结石发生时才会有致癌性。
综上所述，三聚氰胺对生物体（包括人和动物）都具有毒性作用，其主要是对泌尿系统产生损害。三聚氰胺和三聚氰酸单独应用于动物时，本身的毒性作用很低。但它们联合使用时会产生明显的毒性作用，主要对泌尿系统产生损害，包括形成肾结石或膀胱结石，并导致肾功能衰竭或泌尿系统肿瘤形成。它们的毒性具有对动物种的选择性，相对于小鼠，对猫和大鼠的肾脏毒性反应更大。另外，对雄性动物毒性作用更加明显。
4国内外限量要求
2012年7月5日，联合国负责制定食品安全标准的CAC为牛奶中三聚氰胺限量设定了新标准，每千克液态牛奶中三聚氰胺含量不得超过0.15mg。美国、欧盟以及其他国家和组织也设立了各种食品中三聚氰胺MRL标准，见表7-5。总的来说，多数国家将三聚氰胺的限量标准规定为在婴幼儿、孕产妇奶粉中为1mg/kg，其他奶制品中为2.5mg/kg。中国国家食品质量监督检测中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺属于化工原料，不允许添加到食品中；10月8日，卫生部、工业和信息化部、农业部、国家工商行政管理总局和国家质量监督检验检疫总局联合发布公告，制定三聚氰胺在奶与奶制品中的临时管理值：婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺的限量值为1mg/kg，高于1mg/kg的产品一律不得销售。液态奶（包括原料奶）、奶粉、其他配方奶粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。含奶15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。
5样品前处理技术
牛奶、肉、奶粉等动物源性食品样品中富含蛋白质和脂肪，会严重干扰三聚氰胺残留的检测，因此需通过提取、净化、富集等样品前处理技术，除去样品中可能影响检测的杂质组分，以提高检测方法的灵敏度。目前常用的前处理技术有溶剂萃取技术、固相萃取技术、基质分散固相萃取技术、分子印迹技术及免疫亲和色谱净化技术等。
5.1溶剂萃取技术
溶剂萃取是20世纪发展起来的分离技术，其原理是利用溶质在两种互不相溶或者部分互溶的液相之间分配不同的性质来实现目标物的分离或提纯，包括液-液萃取（LLE）和加速溶剂萃取（ASE）等方法，具有选择性高、分离效果好和适应范围广等特点。
三聚氰胺是一种弱碱性化合物，在强酸或强碱环境下可发生水解。三聚氰胺提取在中性、酸性和碱性条件下均可进行，对于食品基质，中性和酸性（pH≤3）条件下提取更为常用。中性条件提取通常使用乙腈-水或者甲醇-水的混合溶液作为提取液。酸性条件提取可选用不同的溶剂及其混合溶液，包括三氯乙酸、甲酸、乙酸、盐酸和三氟乙酸等，其中最常用的为三氯乙酸。三聚氰胺污染的样品一般都富含脂肪和蛋白质，所以在提取前必须进行脱脂和沉淀蛋白质，可先用正己烷和二氯甲烷溶液脱脂，再用三氯乙酸沉淀蛋白质，最后用乙腈来提取三聚氰胺。
但对于三聚氰胺和三聚氰酸的同时检测，目前为了避免三聚氰胺和三聚氰酸的氨基与羟基之间发生聚合反应，形成不溶解的水合物，生鲜乳中三聚氰胺及其类似物测定普遍在酸性或碱性溶液条件下，由水相和乙腈等组成混合提取剂，水相主要包括三氯乙酸溶液、乙酸铅溶液和二乙胺溶液等。乙腈具有一定的沉淀蛋白质作用，可以除去样品中的部分蛋白质，但当乙腈含量过高时，三聚氰酸和三聚氰胺往往容易形成网状聚合物而沉淀，从而降低提取效果，并最终影响回收率和稳定性。朱聪英等通过试验对比了20%二乙胺-乙腈、2%三氯乙酸-乙腈、2.2%乙酸铅-乙腈和乙腈水溶液等提取剂的提取效果。结果表明，在酸性或碱性条件下均有较好的回收率，而用乙酸铅沉淀蛋白质时效果最佳。通过优化提取液比例试验，选用体积比为1∶1的20%二乙胺-乙腈溶液作为提取溶液，并加1mL饱和乙酸铅溶液沉淀蛋白质。
5.2 固相萃取（SPE）技术
SPE是一种基于液相色谱分离机制的样品净化技术，其原理是利用固体吸附剂进行萃取，将液体样品通过填充固体吸附剂的萃取柱，目标物和杂质被吸附而保留在柱上，用选择性溶剂去除杂质，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，从而达到分离和富集目标化合物的目的。
三聚氰胺是一种弱碱性的化合物，在酸性溶液中可电解为正离子，所以通常用阳离子交换SPE柱（如强阳离子交换、混合模式阳离子交换、聚苯乙烯阳离子交换）进行样品纯化以去除中性和酸性干扰物。目前采用SPE柱在各种基质中选择性提取和浓缩三聚氰胺最为广泛，如SCX-C18混合填料反相色谱柱、Waters Oasis MCX柱和Strata-X-C柱等。蔡勤仁等建立了猪组织中三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺及环丙氨嗪的LC-MS/MS检测方法。比较了MCXSPE柱和石墨化碳黑柱的净化效果，结果表明，Sepucol石墨化碳黑柱对5种三聚氰胺类化合物的回收率均能满足要求，MCXSPE柱对环丙氨嗪、三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的回收率最高，但对三聚氰酸和三聚氰酸一酰胺几乎无保留。
洗涤液和洗脱液的种类及应用顺序也会影响三聚氰胺的检测。理论上，对于三聚氰胺的纯化，样品应先用酸性的水溶液洗涤，然后再用甲醇洗脱，这是因为酸性条件有利于三聚氰胺和阳离子基团结合。
虽然SPE具有高效、快速、简便、溶剂耗费少等优点，但在处理大量样品时，仍是一项耗时、耗力的工作。在实际应用时，通常将SPE与其他分析技术联机自动操作，如SPE-HPLC、SPE-LC-MS、SPE-LC-MS/MS等。
5.3基质分散固相萃取技术
基质分散固相萃取是Anastassiades等提出的快速前处理方法，能将样品的提取、净化一步完成，省去了氮吹过程，避免了传统的SPE方法中样品因淋洗、洗脱、转溶、乳化、浓缩造成的待测组分的损失。与传统残留检测方法相比，该净化方法具有回收率高、稳定、简便、快速、经济、环保等优点。
杨玉秀等针对水产品脂肪和蛋白质含量高，成分复杂，含有色素、糖类、有机酸等，采用DSPE的净化方法，较好地去除样品中的杂质，并比较了石墨化碳黑、中性氧化铝和乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）3种净化材料。结果表明，石墨化碳黑可有效去除杂质，但对三聚氰胺也有很强的吸附作用，不适合用于水产品中三聚氰胺的净化；中性氧化铝粒径小、表面积大、吸附性强，对水产品中的蛋白质和脂肪有较好的吸附作用，能有效去除干扰成分；PSA含有伯胺和仲胺基团，具有弱的阴离子交换能力，对水产品中有机酸、色素、糖类等均有良好的保留作用。通过试验，选择100mg中性氧化铝与50mgPSA混合使用，其净化效果更佳。
5.4 分子印迹技术（MIT）
MIT是利用具有分子识别功能的分子印迹聚合物（MIP）的一种识别技术，具有类似于抗体的高选择性、高特异性和高柔韧性等优点，适合作为SPE填料或分子印迹薄膜来分离富集目标化合物，达到样品分离纯化的目的。
目前，使用MIP作为固相吸附剂来特异性提取三聚氰胺的研究还比较少。Li等利用环丙三氨三嗪为模板分子，采用甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯和乙腈分别作为功能单体、交联剂和致孔剂来制备特异性识别三聚氰胺的MIP。该聚合物对三聚氰胺最大结合浓度为53.2mmol/mg，将其作为SPE吸附剂提取样品中的三聚氰胺，建立了牛奶和饲料中三聚氰胺的MIT-GC-MS分析方法，其检测限为0.01μg/g，定量限为0.05μ/g，样品添加回收率为93.1%~101.3%。
牛计伟等以三聚氰胺为模板分子，采用沉淀聚合法制备了高选择性和强吸附容量的三聚氰胺的MIP，将其作为SPE吸附剂，与HPLC联用检测奶粉样品中残留的痕量三聚氰胺。结果，萃取回收率为85.1%~99.7%，SPE过程可以避免繁琐的样品浓缩过程，缩短了样品前处理时间，降低了二次污染，可实现大体积样品提取液的直接净化和富集，从而降低了整个检测方法的检出限。
贺利民等以环丙氨嗪为虚拟模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，采用本体聚合法合成了对三聚氰胺具有良好识别能力的MIP，将其制备成SPE小柱，可有效分离、净化和富集鸡蛋中的三聚氰胺，并结合GC-MS技术测定鸡蛋中的三聚氰胺，方法检出限为10μg/kg，平均回收率为82.8%。
5.5 免疫亲和色谱（IAC）
IAC的原理是将特异性的抗体固定于固相载体上，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等，并装于柱中，然后通过抗原与抗体之间特异性结合来实现样品中目标物的分离净化，同时可对样品中目标物进行浓缩，从而提高检测灵敏度，具有选择性好、操作简单快捷、耗时少、节省试剂等优点，是一种重要的前处理手段。
Zhong等制备了三聚氰胺IAC柱进行受污染食品中三聚氰胺残留的提取和净化，该柱子对三聚氰胺最高结合能力为1 250ng，添加回收率为82.5%~101.4%，变异系数小于10.6%，重复使用次数高达30次，不需要样品前处理即可直接用来提取鸡肉、鸡蛋及奶制品中的三聚氰胺残留。
6检测方法
目前，国内外用于食品中三聚氰胺的检测方法主要是色谱分析法，包括HPLC、LC-MS、GC-MS等；其次是毛细管电泳（CE）、免疫分析法、分子印迹技术、近红外吸收检测法、荧光分析法等。
6.1色谱分析法
色谱分析法是目前使用最广泛的检测方法，具有快速、分离效果好、用量少，且不受样品的限制等特点，特别适用于高沸点、大分子、极性强和热稳定性差的化合物的分析。利用色谱法对三聚氰胺进行测定的报道很多。三聚氰胺的色谱分析检测方法主要有GC、LC、GC-MS和LC-MS等，目前我国国家标准规定的原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法就包括HPLC、HPLC-MS/MS和GC-MS，该方法在原料乳及乳制品中的定量限为2mg/kg。
6.1.1 HPLC
HPLC是目前检测食品中三聚氰胺最常用的方法，国内外报道较多（表7-6）。
将三聚氰胺标准品在200~500nm波长范围内扫描后发现，在236.3nm处测得三聚氰胺的最大吸收，样品中的三聚氰胺在237.4nm处也有最大吸收（图7-13），因此许多报道中多数设定240nm为三聚氰胺的检测波长。
由于三聚氰胺的紫外吸收光谱区低于250nm，当样品制备和色谱条件未达到最优化时容易产生假阳性结果，因此为了增加结果的灵敏度和可信度，常常联合应用DAD系统和荧光反应，检测样品中的三聚氰胺残留。
针对三聚氰胺的化学特性，常用两类色谱柱进行分离：一类是C18和C8柱。三聚氰胺为强极性化合物，在传统的反相色谱中无保留能力，需向流动相中加入离子对试剂与三聚氰胺生成弱极性物质达到分离效果，一般采用缓冲溶液和乙腈为流动相。文献中流动相多数以柠檬酸为缓冲溶液，以庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、己烷磺酸钠为离子对试剂和乙腈以一定比例混合配制而成。另一类是阳离子交换色谱中的LC-SCX柱或IonPac CS柱。该法常使用磷酸盐缓冲溶液为流动相，在紫外波长240nm处检测，样品的加标回收率、相对标准偏差和重现性都比较好。但磷酸盐缓冲溶液是很好的细菌培养基，在使用过程中会导致溶液浑浊出现菌落沉淀，因此有人用乙酸铵和毒性相对较低的甲醇作流动相代替磷酸盐缓冲溶液。
