选择FASTA格式，点击进入。

你就可以得到Human p53的mRNA序列。我们可以直接单击右侧的Pick primer。

2.直接跳到NCBI的Primer-BLAST页面，提交的界面主要包括四个部分：PCR template（模板区）, Primer Parameters（引物参数区）, 和Exon/intron selection（外显子内含子选择区），Primer Pair Specificity Checking Parameters（验证引物特异性）。

在PCR Template下方文本框中我们也输入FASTA格式的序列或Accession Number，或点击“选择文件”载入FASTA格式的文件。右侧可以设置正向引物和反向引物的起始和终止位置。在“Primer Parameters”模块，可以输入PCR产物的大小（PCR product size）和Tm值参数。如何你已经设计好了引物，要拿来验证引物的好坏，可以在此输入。一般产物短设为大小最小值50，最大值设为300。引物Tm温度接近，设置差2℃。

选择引物设计跨越内含子，限制基因组DNA扩增。