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52.吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法，属于分子吸收光谱分析方法
基于外层电子跃迁
53.有机化合物的生色原理
a 跃迁类型
价电子跃迁：σ→σ*, π→π*; n→σ*, n→π*
DE (hn) 顺序: n→π*<π→π*< n→σ*<σ→σ*
b 生色团和助色团
生色团: 含有π→π*跃迁的不饱和基团
助色团: 含非键电子的杂原子基团,如-NH2, -OH, -CH3…
与生色团相连时，会使吸收峰红移，吸收强度增强
54.光吸收定律－朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律
当一束平行单色光垂直照射到样品溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度及光程（溶液的厚度）成正比关系－－－朗伯比尔定律
数学表达：A＝lg(1/T)=Kbc (其中，A:吸光度，T:透射比，K:比例常数，b:溶液厚度，c:溶液浓)
注意：平行单色光；均相介质；无发射、散射或光化学反应
55.灵敏度表示方法
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桑德尔(Sandell)灵敏度： S
当仪器检测吸光度为0.001时，单位截面积光程内所能检测到的吸光物质的最低含量。单位：mg/cm2 S=M/e
56.吸光度的加和性
在某一波长，溶液中含有对该波长的光产生吸收的多种物质，那么溶液的总吸光度等于溶液中各个吸光物质的吸光度之和
A1 = e1bc1 A2 = e2bc2 A = e1bc1 e2bc2
57.分光光度计的组成
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单色器：作用:产生单色光
常用的单色器：棱镜和光栅
样品池（比色皿）
厚度(光程): 0.5, 1, 2, 3, 5…cm
材质：玻璃比色皿－－可见光区
石英比色皿－－可见、紫外光区
检测器
作用：接收透射光，并将光信号转化为电信号
常用检测器：
光电管
光电倍增管
光二极管阵列
58.显色反应及影响因素
显色反应：没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量生成有色化合物再测定－－ 显色反应
要求：
a. 选择性好
b. 灵敏度高 (ε>104)
c. 产物的化学组成稳定
d. 化学性质稳定
e. 反应和产物有明显的颜色差别 (Dl>60nm)
显色反应类型：络合反应；氧化还原反应；离子缔合反应；成盐反应；褪色反应；吸附显色反应
显色剂：无机显色剂: 过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾
有机显色剂：偶氮类：偶氮胂III；三苯甲烷类：三苯甲烷酸性染料 铬天菁S，三苯甲烷碱性染料 结晶紫；邻菲罗啉类：新亚铜灵；肟类：丁二肟
影响因素：
a 溶液酸度（pH值及缓冲溶液）
u 影响显色剂的平衡浓度及颜色，改变Δl
u 影响待测离子的存在状态，防止沉淀
u 影响络合物组成
b 显色剂的用量：稍过量，处于平台区
c 显色反应时间：针对不同显色反应确定显示时间
显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定；
显色反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定
d 显色反应温度：加热可加快反应速度，导致显色剂或产物分解
e 溶剂：有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率
f 干扰离子：消除办法：提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态 ；选择合适参比 ；褪色空白(铬天菁S测Al，氟化铵褪色，消除锆、镍、钴干扰)；选择适当波长
59.测定波长选择
